Sebutkan pengertian kloning gen dan PCR

Pengertian dari kloning gen dan PCR. Membuat lebih banyak salinan DNA dari DNA tunggal yang diinginkan disebut amplifikasi DNA atau proliferasi DNA. Dua metode untuk memperkuat DNA adalah kloning gen dan PCR (Polymerase Chain Reaction). Kloning gen adalah produksi beberapa salinan dari DNA yang diinginkan in vivo dengan membangun rDNA dan memperkenalkan ke bakteri. Polymerase chain reaction (PCR) adalah amplifikasi in vitro DNA oleh siklus berulang pada pemisahan untai dan polimerisasi. PCR ditemukan oleh Kary Mullis pada tahun 1985.

Kloning gen adalah teknik yang digunakan untuk menemukan dan melipatgandakan gen spesifik dari DNA genom yang diekstraksi dari suatu organisme melalui konstruksi DNA rekombinan. DNA genom mengandung ribuan gen berbeda yang disandikan untuk protein. Ketika DNA diekstraksi, itu mencakup semua gen yang mungkin ditanggungnya. Teknik kloning gen telah memungkinkan deteksi gen spesifik dari total DNA. Oleh karena itu kloning gen berfungsi sebagai alat penting dalam biologi molekuler.

Pembuatan perpustakaan genom suatu organisme sangat penting dalam kloning gen jika tidak ada petunjuk tentang lokasi gen yang relevan dalam DNA. Pustaka genom dibuat menggunakan langkah-langkah berikut.

Langkah 1: Ekstraksi total DNA dari suatu organisme yang mengandung gen yang diinginkan.

Langkah 2: Batasi pencernaan dari DNA yang diekstraksi untuk menghasilkan fragmen kecil yang dapat dikelola. Langkah ini difasilitasi oleh restriksi endonucleases.

Langkah 3: Pemilihan vektor yang sesuai dan membuka DNA vektor menggunakan endonuklease pembatasan yang sama. Plasmid bakteri biasanya digunakan sebagai vektor untuk membawa DNA asing. Plasmid adalah lingkaran kecil DNA yang terletak di dalam bakteri.

Langkah 4: Menggabungkan vektor DNA dan DNA terfragmentasi untuk menghasilkan molekul DNA rekombinan. Langkah ini diatur oleh DNA ligaseangkah 5: Mentransfer molekul DNA rekombinan menjadi bakteri inang. Langkah ini dikenal sebagai transformasi, dan dilakukan dengan menggunakan sengatan panas.

Langkah 5: Penapisan sel bakteri yang ditransformasikan pada media kultur. Populasi campuran sel inang yang ditransformasi dan yang tidak diubah diperoleh pada akhir proses transformasi. Sebagai gen yang menarik hanya termasuk dalam sel inang yang ditransformasi. Oleh karena itu, perlu untuk memilih sel yang diubah. Pemilihan dilakukan menggunakan media selektif yang mengandung antibiotik. Hanya sel yang ditransformasi yang tumbuh pada media skrining ini yang memungkinkan pemilihan.

Langkah 6: Menumbuhkan bakteri untuk menghasilkan perpustakaan gen. Pada langkah ini, sel inang yang ditransformasi dimasukkan ke dalam media kultur segar yang menyediakan kebutuhan pertumbuhan yang optimal. Total koloni pada lempeng kultur mewakili perpustakaan genom organisme itu.

Langkah 7: Molekul DNA rekombinan yang mengandung gen yang diminati harus disaring dari ribuan fragmen DNA rekombinan yang dikloning. Ini dapat dicapai dengan menggunakan probe yang menandai gen spesifik atau protein spesifik hasil dari gen itu.

Setelah gen tertarik yang mengandung koloni bakteri diidentifikasi dari total koloni, dimungkinkan untuk membuat jutaan salinan dari plasmid rekombinan yang mengandung gen. Kloning gen digunakan dalam membangun perpustakaan gen, menghasilkan protein khusus, vitamin, antibiotik, hormon, sekuensing dan pemetaan genom organisme, membuat banyak salinan individu DNA dalam forensik